常用培養(yǎng)基配方
01 糖發(fā)酵管
成分:
牛肉膏 5g
蛋白胨 10g
氯化鈉 3g
磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O） 2g
0.2%滇麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH7.4
制法:
1葡萄糖發(fā)酵管按上述成分配好后,按0.5%加入葡萄糖,分裝于有一個倒置小管的小試管內(nèi),121℃高壓滅菌15min.
2其他各種糖發(fā)酵管可按上述成分配好后,分裝每瓶100mL,121℃高壓滅菌15min.另將各種糖類分別配好10%溶液,同時高壓滅菌.將5mL糖溶液加入于100mL培養(yǎng)基內(nèi),以無菌操作分裝小試管.
注:蔗糖不純,加熱后會自行水解者,應(yīng)采用過濾法除菌.
試驗方法:從瓊脂斜面上挑取小量培養(yǎng)物接種,于36℃±1℃培養(yǎng),一般觀察2～3d.遲緩反應(yīng)需觀察14～30d.
02 ONPG培養(yǎng)基
成分:
鄰硝基酚β-D-半乳糖昔（ONPG） 60mg
（O-Nitrophenyl-β-D-galactopyranoside）
0.01mol/L磷酸鈉緩沖液（pH7.5） 10mL
1%蛋白胨水（PH7.5） 30mL
制法:將ONPG溶于緩沖液內(nèi),加入蛋白胨水,以過濾法除菌,分裝于10mm×75mm試管,每管0.5mL,用橡皮塞塞緊.
試驗方法:自瓊脂斜面上挑取培養(yǎng)物1滿環(huán)接種,于36±1℃培養(yǎng)1～3h和24h觀察結(jié)果.如果β-半乳糖苷酶產(chǎn)生,則于1～3h變黃色,如無此酶則24h不變色.
03 西蒙氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
檸檬酸鈉 5g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
制法:先將鹽類溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化.然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜面.
試驗方法:挑取少量瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)4d,每天觀察結(jié)果.陽性者斜面上有菌落生長,培養(yǎng)基從綠色轉(zhuǎn)為藍色.
04 緩沖葡萄糖蛋白胨水（MR和VP試驗用）
成分:
磷酸氫二鉀 5g
多胨 7g
葡萄糖 5g
蒸餾水 1000mL
pH7.0
制法:溶化后校正pH,分裝試管,每管1mL,121℃高壓滅菌15min.
甲基紅（MR）試驗:自瓊脂斜面挑取少量培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2～5d,哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng).滴加甲基紅試劑一滴,立即觀察結(jié)果.鮮紅色為陽性,黃色為陰性.甲基紅試劑配法:10mg甲基紅溶于30mL95%乙醇中,然后加入20mL蒸餾水.
V-P試驗:用瓊脂培養(yǎng)物接種本培養(yǎng)基中,于36±1℃培養(yǎng)2～4d.哈夫尼亞菌則應(yīng)在22～25℃培養(yǎng).加入6%α-萘酚-乙醇溶液0.5mL和40%氫氧化鉀溶液0.2mL,充分振搖試管,觀察結(jié)果.陽性反應(yīng)立刻或于數(shù)分鐘內(nèi)出現(xiàn)紅色,如為陰性,應(yīng)放在36±1℃下培養(yǎng)4h再進行觀察.
05克氏檸檬酸鹽培養(yǎng)基
成分:
檸檬酸鈉 3g
葡萄糖 0.2g
酵母浸膏 0.5g
單鹽酸半胱氨酸 0.1g
磷酸二氫鉀 1g
氯化鈉 5g
0.2%酚紅溶液 6mL
瓊脂 15g
蒸餾水 1000mL
制法:加熱溶解,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.放成斜面.
試驗方法:用瓊脂培養(yǎng)物接種整個斜面,在36±1℃培養(yǎng)7d,每天觀察結(jié)果.陽性者培養(yǎng)基變?yōu)榧t色.
06 丙二酸鈉培養(yǎng)基
成分:
酵母浸膏 1g
硫酸銨 2g
磷酸氫二鉀 0.6g
磷酸二氫鉀 0.4g
氯化鈉 2g
丙二酸鈉 3g
0.2%溴麝香草酚藍溶液 12mL
蒸餾水 1000mL
pH6.8
制法:先將酵母浸膏和鹽類溶解于水,校正pH后再加入指示劑,分裝試管,121℃高壓滅菌15min.
試驗方法:用新鮮的瓊脂培養(yǎng)物接種,于36±1℃培養(yǎng)48h,觀察結(jié)果.陽性者由綠色變?yōu)樗{色.
07 葡葡糖銨培養(yǎng)基
成分:
氯化鈉 5g
硫酸鎂（MgSO4·7H2O） 0.2g
磷酸二氫銨 1g
磷酸氫二鉀 1g
葡萄糖 2g
瓊脂 20g
蒸餾水 1000mL
0.2%溴麝香草酚藍溶液 40mL
pH6.8
制法:先將鹽類和糖溶解于水內(nèi),校正pH,再加瓊脂,加熱溶化,然后加入指示劑,混合均勻后分裝試管,121℃高壓滅菌15min,放成斜面.
試驗方法:用接種針輕輕觸及培養(yǎng)物的表面,在鹽水管內(nèi)做成極稀的懸液,肉眼觀察不見混濁,以每一接種環(huán)內(nèi)含菌數(shù)在20～100之間為宜.將接種環(huán)滅菌后挑取菌液接種,同時再以同法接種普通斜面一支作為對照.于36±1℃培養(yǎng)24h.陽性者葡萄糖銨斜面上有正常大小的菌落生長;陰性者不生長,但在對照培養(yǎng)基上生長良好.如在葡萄糖銨斜面生長極微小的菌落可視為陰性結(jié)果.
注:容器使用前應(yīng)用清潔液浸泡.再用清水,蒸餾水沖洗干凈,并用新棉花做成棉塞,干熱滅菌后使用.如果操作時不注意,有雜質(zhì)污染時,易造成假陽性的結(jié)果.
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